细胞计数方法

实验原理：当待测细胞悬液中细胞均匀分布时，通过测定一定体积悬液中的细胞的数目，即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。

具体操作：

一.准备工作：

取一皿传代的细胞，待长成单层后以备使用。

二.细胞悬液制备：

取一皿需计数的细胞，PBS液洗涤2-3遍后，用0.25％的胰蛋白酶液消化，加入至少等量的完全培养基（含10%血清）停止消化，离心机设置转速1000rpm，离心5min，去除上清液后，重新加入适量完全培养基，吹打制成待测细胞悬液。

三.使用细胞计数仪进行计数

1.取一块细胞计数板，使用移液器吸取20μL细胞悬液，将细胞悬液滴入计数板加样孔内，待细胞悬液完全布满计数槽。

2.打开细胞计数仪，将细胞计数板插入孔内。

3.使用细胞计数仪随机选取至少三个视野进行计数。

三.细胞计数要点：

1.进行细胞计数时，要求悬液中细胞数目不低于10⁴个/ml，如果细胞数目很少要进行离心再悬浮于少量培养液中；

2.要求细胞悬液中的细胞分散良好，否则影响计数准确性。

3.取样计数前，应充分混匀细胞悬液，尤其时多次取样计数时更要注意每次取样都要混匀，以求计数准确；